Jena Bioscience由德國馬普所(MPI)的分子生理學(xué)家于1998年共同創(chuàng)辦的生物公司，致力為的科研院所、醫(yī)院、制藥企業(yè)以及診斷試劑盒生產(chǎn)企業(yè)提供各類試劑。在結(jié)構(gòu)學(xué)研究方面全面提供晶體篩選試劑盒、優(yōu)化試劑、工具和各類耗材等。

jenabioscience PP-101說明書

JBS dNTP-Mutagenesis Kit

JBS dNTP誘變試劑盒

dNTP類似物的隨機誘變

圖1：dPTP和8-Oxo-dGTP的結(jié)構(gòu)

圖2：誘變速率與PCR循環(huán)數(shù)的關(guān)系[Zaccolo 等。]

僅用于體外！

運輸：在藍色冰上運輸

儲存條件：在-20°C下儲存，
避免冷凍/融化循環(huán)，強烈建議在使用前等分修飾核苷酸

保質(zhì)期： 12個月

描述：
JBS誘變系列
在三十億年的進化過程中，自然界通過反復(fù)反復(fù)的隨機誘變循環(huán)，然后通過體內(nèi)選擇編碼蛋白的功能，自然產(chǎn)生了過多的蛋白。在過去的二十年中，這個自然進化的例子指導(dǎo)研究人員開發(fā)了蛋白質(zhì)體外排列的策略。
在應(yīng)用的各種策略中，出現(xiàn)了三種主要的強大技術(shù)。

dNTP類似物的隨機誘變
此方法基于通過PCR將誘變的dNTP類似物（例如8-oxo-dGTP和dPTP）摻入擴增的DNA片段中。僅在四種天然dNTP的存在下，通過第二個PCR步驟消除了誘變dNTP，致突變率高達20％。
→ JBS dNTP誘變試劑盒＃PP-101

由Caldwell＆Joyce（1992）開發(fā)的Error-Prone PCR進行隨機誘變該方法在引起DNA聚合酶錯誤率增加的條件下，利用PCR反應(yīng)在目的基因中引入了突變。易錯PCR的誘變率在0.6-2.0％的范圍內(nèi)。
→ JBS Error-Prone套件＃PP-102

通過DNA
改組進行隨機誘變 Stemmer（1994）開發(fā)的DNA改組通過隨機分裂一個基因或一組相關(guān)基因來生成文庫，然后在自引發(fā)PCR反應(yīng)中重組片段。該方法允許重組來自不同相關(guān)基因的序列。誘變的總速率約為。0.7％。
→ JBS DNA改組試劑盒＃PP-103

Jena Bioscience現(xiàn)在在單獨的套件中提供了每種“即用型”技術(shù)所需的所有必要組件，并附有精簡的文檔，可很大程度地提高成功率。

含量：
Taq聚合酶（紅色帽）
5單位/微升，40微升

誘變緩沖液（綠帽）
10x濃度，200μl

dNTP混合液（白色帽）
每個10 mM dNTP（dATP，dCTP，dGTP，dTTP），100μl

dPTP（黃色瓶蓋）
10 mM，40μl

8-oxo-dGTP（藍帽）
10 mM，40μl

PCR級水（白色瓶蓋）
2x 1毫升

dNTP類似物
8-oxo-dGTP和dPTP的隨機誘變是誘變的dNTP類似物，可使用Taq聚合酶通過PCR將其摻入DNA [Zaccolo 等。，Zang 等。]。
將8-Oxo-dGTP摻入模板腺嘌呤對面，產(chǎn)生兩個過渡突變：A→C：T→G。誘變的總速率約為 據(jù)報道有2％（圖2），其中A→C：T→G的比率約為1。1：1.5。

據(jù)報道，dNTP模擬物dPTP約為。誘變作用是8-oxo-dGTP的10倍（圖2）。dPTP誘導(dǎo)的突變以大約5：4：1：1的比率發(fā)生（A→G：T→C：G→A：C→T），總誘變率高達19％。
由8-Oxo-dGTP和/或dPTP誘導(dǎo)的隨機誘變在兩步PCR過程中進行。首先，在四種天然dNTP加誘變類似物dPTP和/或8-Oxo-dGTP的存在下擴增目標DNA片段。誘變速率可以通過PCR循環(huán)數(shù)輕松控制（圖2）。

然后，在不存在誘變類似物的情況下，將首輪PCR的產(chǎn)物進行第二輪PCR。該步驟在克隆和轉(zhuǎn)化之前從靶DNA中消除了非天然類似物。

推薦的測定準備

• 對于50μl反應(yīng)，請在無菌小瓶中加入5μl10x誘變緩沖液
• 添加多25 fmol模板DNA和0.2-1μM合適的引物
• 加入2.5μldNTP混合物
• 加入2.5μl每個誘變類似物
• 加入1μl（5 u）Taq聚合酶
• 加入PCR級水至終體積為50μl

推薦的熱循環(huán)條件

循環(huán)數(shù)：5-30（請參見圖2）
。誘變的速率主要取決于循環(huán)數(shù)（圖2），并且可以通過誘變dNTP的數(shù)量進行微調(diào)[Zaccolo 等。]。

終PCR
為了消除誘變性dNTP，在第二步PCR中使用等分的1μlPCR反應(yīng)作為模板。取10x誘變緩沖液，并按上述相同濃度添加模板，引物，dNTP Mix和Taq聚合酶。裝滿PCR級水至50μl。
使用相同的熱循環(huán)條件，但20-30個循環(huán)。

精選參考文獻：
Zang 等。（2006）而高保真度的dCTP與7,8-dihydro-8-oxodeoxyguanosine相對，通過sololotarius DNA聚合酶Dpo4。Journal of Biological Chemistry281：2358。
Zaccolo 等。（1999）高頻隨機誘變對體外蛋白質(zhì)進化的影響：TEM-1β-內(nèi)酰胺酶的研究。J.摩爾 生物學(xué) 285（2）：775。
Crameri 等。（1998）DNA改組從不同種類的基因家庭加速定向進化。自然 391：288。
Zaccolo 等。（1996）一種使用核苷類似物的三磷酸酯衍生物的混合物隨機誘變DNA的方法。J.摩爾 生物學(xué) 255：589。
Stemmer（1994）通過DNA改組在體外快速進化蛋白質(zhì)。自然 370：389。
Cadwell 等。（1992）通過PCR誘變使基因隨機化。PCR方法。應(yīng)用 2：28。